­　　韓春雨

­　　河北科技大學(xué)副教授韓春雨震驚全球?qū)W術(shù)界的新基因編輯技術(shù)NgAgo-gDNA，正遭遇越來越多的質(zhì)疑。從5月2日他的論文發(fā)布在《自然-生物技術(shù)》網(wǎng)絡(luò)版之后，到現(xiàn)在為止，全球仍沒有一家實(shí)驗(yàn)室對外宣布，能夠完全成功重復(fù)韓春雨的實(shí)驗(yàn)?，F(xiàn)在已有多國科學(xué)家要求《自然-生物技術(shù)》介入調(diào)查，并公開韓春雨實(shí)驗(yàn)中的所有原始數(shù)據(jù)和實(shí)驗(yàn)條件。

­　　北京時(shí)間7月29日，一度支持韓春雨的澳大利亞國立大學(xué)的基因?qū)W家Gaetan Burgio，反戈一擊。他在Twitter上發(fā)布長文《我的NgAgo經(jīng)歷》，否認(rèn)了自己7月15日之前部分重復(fù)實(shí)驗(yàn)時(shí)得出的結(jié)論，表示并無嚴(yán)格意義上的證據(jù)顯示韓春雨的NgAgo-gDNA技術(shù)有基因編輯的跡象，并且要求韓春雨公開所有原始數(shù)據(jù)和實(shí)驗(yàn)條件。

­　　韓春雨的NgAgo-gDNA技術(shù)，挑戰(zhàn)的是最為流行的基因編輯技術(shù)CRISPR-CAS9，論文剛一發(fā)表，就引發(fā)了轟動?；蚓庉嫾夹g(shù)是指能夠讓人類對目標(biāo)基因進(jìn)行“編輯”，實(shí)現(xiàn)對特定DNA片段的敲除、加入等。目前CRISPR-CAS9是最為普遍的基因編輯技術(shù)，被稱為“基因魔剪”。 5月2日，韓春雨課題組的論文《DNA-guided genome editing using the Natronobacterium gregoryi Argonaute》在《Nature Biotechnology》在線發(fā)表。繞開時(shí)興的CRISPR-CAS9技術(shù)，課題組利用格氏嗜鹽堿桿菌（Natronobacterium gregoryi）的Argonaute核酸內(nèi)切酶，以DNA為介導(dǎo)進(jìn)行基因組編輯，簡稱NgAgo-gDNA。

­　　質(zhì)疑韓春雨的Gaetan Burgio在7月29日發(fā)布的長文中介紹了重復(fù)實(shí)驗(yàn)的具體過程操作和結(jié)論，附帶了7張實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖。

­　　受精卵原核注射NgAgo之后，基于囊胚的PCR結(jié)果。

­　　對NgAgo注射過的受精卵PCR產(chǎn)物的T7核酸內(nèi)切酶檢測。

­　　當(dāng)用高濃度5"磷酸化的ssDNA(25納克/微升)和NgAgo原核注射小鼠受精卵之后基于囊胚的PCR和電泳凝膠。

­　　對小鼠囊胚進(jìn)行NgAgo、5’磷酸化ssDNA原核共注射之后獲得囊胚，進(jìn)行DNA提取、PCR擴(kuò)增和測序之后的一個(gè)典型測序結(jié)果。

­　　微注射NgAgo的小鼠受精卵凝膠電泳。

­　　代表性的所有電泳膠的序列的Clustal比對。Ank-1作為參考序列。

­　　一個(gè)代表性測序色譜圖(使用反向引物測序)。

­　　他表示：在多番嘗試、試驗(yàn)3個(gè)不同的細(xì)胞后，沒有發(fā)現(xiàn)嚴(yán)格意義上證明NgAgo發(fā)生基因編輯的證據(jù)；在他看來，NgAgo酶需要加熱到50攝氏度才能有效，對37攝氏度下NgAgo內(nèi)切酶的活性表示質(zhì)疑。

­　　在長文中，Gaetan Burgio表示，“《自然生物技術(shù)》期刊應(yīng)該要求韓春雨公開所有的原始數(shù)據(jù)和實(shí)驗(yàn)條件”，并認(rèn)為：“NgAgo的未來并不明朗?！?/p>

­　　Gaetan Burgio選擇了小鼠受精卵進(jìn)行重復(fù)實(shí)驗(yàn)。因?yàn)樗L期研究小鼠細(xì)胞，較為熟悉，并在兩年半前，用小鼠細(xì)胞，完成了他的首次CRISPR-Cas9基因編輯。由于韓春雨的論文中使用的是人體細(xì)胞，嚴(yán)格意義上來說，Gaetan Burgio和韓春雨所做的不是同一個(gè)實(shí)驗(yàn)。但由于小鼠和人體結(jié)構(gòu)相似，一般認(rèn)為人體細(xì)胞能完成的實(shí)驗(yàn)也能在小鼠細(xì)胞上進(jìn)行。

­　　在Gaetan Burgio發(fā)文后不久，來自西班牙高等科學(xué)委員會（CSIC）下設(shè)的國立生物技術(shù)中心（Centro Nacional de Biotecnologia）的科學(xué)家Lluis Montoliu轉(zhuǎn)發(fā)了該文，并在Twitter上寫道：“CRISPR萬歲?。?！CRISPR-Cas9系統(tǒng)會用上數(shù)百億萬年而不衰。難以擊垮。”

­　　據(jù)公開資料顯示，2015年，Lluis Montoliu從非營利組織“國際轉(zhuǎn)基因技術(shù)協(xié)會”（The International Society for Transgenic Technologies）卸任主席之位。他的Twitter簡介顯示，Lluis Montoliu的研究方向是哺乳動物的基因組，以及基于轉(zhuǎn)基因動物研究人類的罕見疾病。

­　　Lluis Montoliu在Twitter上透露，在NgAgo之前，他們曾用大約2年時(shí)間，試圖測試Ago家族中來自Thermus thermophiles嗜熱棲熱菌的酶TtAgo，但同樣失敗。

­　　隨后，7月30日，Lluis Montoliu更新博文稱，他已經(jīng)停止了所有關(guān)于NgAgo的項(xiàng)目，同時(shí)“建議所有想做這件事人不要再浪費(fèi)資源”。

­　　7月30日傍晚，方舟子在Twitter上貼出四張郵件截圖，并附文稱“國際轉(zhuǎn)基因技術(shù)協(xié)會原主席Montoliu今天向協(xié)會會員發(fā)信，建議停止驗(yàn)證河北科大韓春雨實(shí)驗(yàn)，不要再浪費(fèi)時(shí)間、金錢和人員。針對該技術(shù)調(diào)查表明，140個(gè)回復(fù)中，只有一個(gè)（中國神經(jīng)所仇子龍？）回答有效，73 個(gè)無效，63 個(gè)在驗(yàn)證?！?/p>

­　　圖片顯示，發(fā)件方為代表Lluis Montoliu的“國際轉(zhuǎn)基因技術(shù)協(xié)會”，郵件名為“對Ago的巨大失望：CRISPR萬歲！”，發(fā)送時(shí)間為當(dāng)?shù)貢r(shí)間7月29日上午9點(diǎn)49分。郵件用加粗字體寫道：“（目前最重要的信息是）NgAgo在哺乳動物細(xì)胞的基因編輯中不起作用”、“我建議所有人放棄涉及NgAgo的項(xiàng)目”。

­　　方舟子所貼的郵件截圖。

­　　有基因?qū)W家對澎湃新聞（www.thepaper.cn）表示，如果最終《自然-生物技術(shù)》雜志在介入調(diào)查后也認(rèn)為韓春雨的實(shí)驗(yàn)是無效的，那么他在5月2日發(fā)表的論文將會被《自然-生物技術(shù)》刪除。